免疫組化可以輔助病理診斷、指導、評估預后，所以在做免疫組化過程中的質(zhì)控問題處理尤其重要。免疫組化技術(shù)是利用已知的特異性抗體或抗原特異性結(jié)合的特點，通過化學反應使標記于結(jié)合后的特異性抗體上的顯示劑通過借助顯微鏡的觀察，從而在抗原抗體結(jié)合部位確定組織細胞結(jié)構(gòu)的一門組化技術(shù)。在病理診斷、基礎(chǔ)醫(yī)學研究工作中免疫組化技術(shù)已成為非常重要的手段。隨著免疫組化試劑新種類不斷出現(xiàn)及方法的改進，特別是即用型試劑盒的出現(xiàn)，使抗體的標記更加簡便、快捷，更加規(guī)范化，標準化的實驗操作是必不可少的。免疫組化標準化染色技術(shù)是一項實驗性很強的技術(shù)，任何一個環(huán)節(jié)出現(xiàn)問題，都可以直接影響免疫組化結(jié)果免疫組化切片 不掉片，厚薄均勻哪里好找上海融享生物。江蘇特殊染色免疫組化檢測電話

基本原理編輯

抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性，免疫組織化學正是利用了這一原理。先將組織或細胞中的某種化學物質(zhì)提取出來，以此作為抗原或半抗原，通過免疫動物后獲得特異性的抗體，再以此抗體去探測組織或細胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復合物是無色的，因此還必須借助于組織化學的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來，以期達到對組織或細胞中的未知抗原進行定性，定位或定量的研究。分類編輯

免疫組織化學技術(shù)按照標記物的種類可分為免疫熒光法、免疫酶法、免疫鐵蛋白法、免疫金法及放射免疫自顯影法等。

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    ——90年代分子雜交技術(shù)、原位雜交技術(shù)、免疫細胞化學分類方法迅速發(fā)展?！?000年各種免疫組化技術(shù)更加成熟，使免疫組化技術(shù)成為當今生物醫(yī)學中形態(tài)、功能代謝綜合研究的一項有力工具。其應用范圍深達醫(yī)學各個學科，是目前生命科學工作者應該掌握的基本技術(shù)之一。免疫組化技術(shù)技術(shù)分類（1）根據(jù)染色方式分成：①貼片染色②漂浮染色（2）根據(jù)Ag—Ab結(jié)合方式分成：①直接法②間接法③多層法（3）按標記物的性質(zhì)分成：①免疫熒光技術(shù)（免疫熒光法）②免疫酶技術(shù)（酶標抗體法、橋法、PAD法、ABC法）③免疫金屬技術(shù)（免疫鐵蛋白法、免疫金染色法、蛋白A金法）免疫組化技術(shù)標記物（1）必要性：組織細胞內(nèi)Ag—Ab結(jié)合反應一般是不可見的，若在鏡下檢測，則必須具有可視性標記物。（2）常用標記物①熒光素：較常用的是異硫一氰酸熒光素（Fluoresceinisothiocyanate，F(xiàn)ITC）——熒光顯微鏡下呈綠色熒光四乙基羅達明（rho—damineRB200）——熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光②酶：辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶。③生物素：（Biotin）④鐵蛋白金等：主要應用于免疫電鏡。其他：如同位素（因涉及污染和防護難一般不用）免疫組化技術(shù)應用凡是組織細胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)。

色反應的控制  免疫酶染色應注意控制：①成色質(zhì)濃度和溫育時間可調(diào)節(jié) ，增加成色質(zhì)的量和/或增加底物溫育時間，可增加反應產(chǎn)物強度。著色太深可減少溫育反應時間。②過氧化物酶顯色時，H2O2較大濃度將使顯色反應過快而致背景加深；過量H2O2可能88酶的活性。

  4．復染  根據(jù)所用的染色方法和呈顯顏色等，可選用適當?shù)膹腿痉椒?。如陽性結(jié)果呈紅或棕色，則用蘇木素將細胞核染成蘭色，以便定位檢測。也可用1%～2%甲基綠復染。

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根據(jù)標記物的不同，免疫細胞化學技術(shù)可分為免疫熒光細胞化學技術(shù)，免疫酶細胞化學技術(shù)，免疫鐵蛋白技術(shù)，免疫金-銀細胞化學技術(shù)，親和免疫細胞化學技術(shù)，免疫電子顯微鏡技術(shù)等。近些年來，核酸分子原位雜交技術(shù)采用生物素、地高辛等非放射性物質(zhì)標記探針，和免疫細胞化學技術(shù)密切結(jié)合，發(fā)展為雜交免疫細胞化學技術(shù)。不同的免疫細胞化學技術(shù)，各具有獨特的試劑和方法，但其基本技術(shù)方法是相似的，都包括抗休的制備，組織材料的處理、免疫染色、對照試驗、顯微鏡觀察等步驟。還有雙重和多重標記技術(shù)也有重要的用途。上海融享生物免疫朱短周期，服務(wù)優(yōu)。浙江免疫組化公司電話

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減少或消除非特異性染色的方法  組織中非抗原抗體反應出現(xiàn)的陽性染色稱為非特異性背景染色，較好常見的原因是蛋白吸附于高電荷的膠元和結(jié)締組織成分上。有效方法是在用首先抗體前加制備第二抗體動物之非免疫血清（1：5-1：20）封閉組織上帶電荷基團而除去與首先抗體非特異性結(jié)合。必要時可加入2%-5%牛血清白蛋白，可進一步減少非特異性染色。作用時間為10-20min。也可用除制備首先抗體以外的其它動物血清（非免疫的）。有明顯溶血的血清不能用，以免產(chǎn)生非特異性染色。免疫熒光染色時，可用0.01%伊文氏蘭(PBS溶液)稀釋熒光抗體,對消除背景的非特異性熒光染色有很好的效果。當然使用特異性高、效價高的首先抗體是較好重要的條件。洗滌用的緩沖液中加入0.85%~1%NaCl成為高鹽溶液,充分洗滌切片,能有效的減少非特異性結(jié)合而減少背景染色。江蘇特殊染色免疫組化檢測電話