紡錘體觀測(cè)儀在補(bǔ)救ICSI中的應(yīng)用我們知道,成熟的卵母細(xì)胞排出***極體。IVF加入精子后,精子會(huì)穿透層層障礙**終進(jìn)入卵子,隨著時(shí)間的推移,卵子的紡錘體會(huì)將染色單體拉向兩極,進(jìn)而排出第二極體,再往后大約加精后9-16小時(shí),雌雄原核會(huì)出現(xiàn),而原核的出現(xiàn)才是受精的標(biāo)志。但是對(duì)于那些沒有受精的卵子,到了原核出現(xiàn)的時(shí)間窗,發(fā)現(xiàn)沒有受精時(shí)再去補(bǔ)救ICSI,往往錯(cuò)過了卵子的比較好受精時(shí)間,因?yàn)闆]有受精的卵子會(huì)在體外老化,即使受精,胚胎的發(fā)育潛能也很低。所以,我們?cè)诩泳蟮?-6小時(shí),通過觀察第二極體的排出來(lái)初步判斷是否受精,**的增加了那些受精障礙患者的受精率,也避免了卵子的老化。當(dāng)然,偶爾也會(huì)出現(xiàn)錯(cuò)誤補(bǔ)救。文獻(xiàn)報(bào)道對(duì)IVF受精后的未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行ICSI補(bǔ)救,實(shí)驗(yàn)組用紡錘體觀測(cè)儀觀察并統(tǒng)計(jì)紡錘體的數(shù)目,82.7%含有一個(gè)紡錘體,17.3%含有兩個(gè)紡錘體,并對(duì)含有一個(gè)紡錘體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI;而對(duì)照組并未用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體,只對(duì)未排出第二極體的卵母細(xì)胞進(jìn)行補(bǔ)救ICSI。結(jié)果發(fā)現(xiàn),使用紡錘體觀測(cè)儀觀察紡錘體的數(shù)目能顯著提高正常受精率,降低多原核受精比率。紡錘體的一端連接著染色體,另一端則錨定在細(xì)胞兩極。上海輔助生殖紡錘體改善分級(jí)
紡錘體功能分解在細(xì)胞分裂中,其主要作用有兩個(gè)部分。其一為排列與分裂染色體。紡錘體的完整性決定了染色體分裂的正確性。紡錘體的正常生成是染色體排列的必要條件。紡錘體生成完畢后一般會(huì)有5-20分鐘的延遲,以供細(xì)胞調(diào)整著絲點(diǎn)上微管束的極性,以及決定是否所有的著絲點(diǎn)都附著正確。此后細(xì)胞進(jìn)入分裂后期,染色體分裂為兩組數(shù)目相等的姐妹染色單體。同樣,紡錘體的完整性決定這個(gè)分裂過程在時(shí)間和空間上的準(zhǔn)確性。紡錘體另一功能為決定胞質(zhì)分裂的分裂面。染色體分裂的同時(shí),紡錘體中的一部分微管不隨染色體分裂到兩極,而停弛在紡錘體**,形成紡錘**體(centralspindle)。在紡錘中體的**為兩組極性相反的微管交疊的區(qū)域,稱為紡錘**區(qū)(spindlemidzone).此**區(qū)就是接下來(lái)的胞質(zhì)分裂面。胞質(zhì)分裂開始于分裂后期的較晚期。胞質(zhì)分裂一般結(jié)束于分裂末期后1-2小時(shí),此期間兩個(gè)子細(xì)胞由中心顆粒體(midbody)連接。一般認(rèn)為紡錘體的分解發(fā)生在細(xì)胞分裂末期。上海輔助生殖紡錘體改善分級(jí)紡錘體在細(xì)胞分裂后期推動(dòng)染色體向細(xì)胞兩極移動(dòng)。
神經(jīng)退行性疾病是一類以神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞功能障礙和死亡為主要特征的疾病,包括阿爾茨海默?。ˋlzheimersdisease,AD)、帕金森?。≒arkinsonsdisease,PD)、亨廷頓?。℉untingtonsdisease,HD)等。近年來(lái),研究表明紡錘體功能障礙在神經(jīng)退行性疾病的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。阿爾茨海默病是最常見的神經(jīng)退行性疾病之一,其主要病理特征是淀粉樣蛋白(Aβ)沉積和tau蛋白過度磷酸化形成的神經(jīng)纖維纏結(jié)。研究表明,紡錘體功能障礙在阿爾茨海默病的發(fā)生和發(fā)展中起著重要作用。
冷凍電鏡技術(shù)(Cryo-EM)近年來(lái)在結(jié)構(gòu)生物學(xué)領(lǐng)域取得了重大突破,也為紡錘體卵冷凍研究提供了新的視角。通過將生物樣品冷凍至極低溫并在電子顯微鏡下進(jìn)行觀察和成像,冷凍電鏡能夠揭示生物大分子的高分辨率結(jié)構(gòu),包括紡錘體微管等精細(xì)結(jié)構(gòu)。這一技術(shù)不僅克服了傳統(tǒng)電鏡技術(shù)對(duì)樣品制備的嚴(yán)格要求,還能夠在接近生理狀態(tài)下觀察紡錘體的形態(tài)和功能,為無(wú)損觀察紡錘體提供了強(qiáng)有力的技術(shù)支持。無(wú)損觀察紡錘體技術(shù)能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)測(cè)冷凍過程中紡錘體的形態(tài)變化,從而準(zhǔn)確評(píng)估冷凍保存的效果。通過對(duì)比冷凍前后紡錘體的形態(tài)和穩(wěn)定性,研究者可以優(yōu)化冷凍保護(hù)劑的配方和濃度,以及改進(jìn)冷凍程序,減少冷凍損傷,提高解凍后卵母細(xì)胞的存活率和發(fā)育潛能。紡錘體微管與染色體之間的相互作用是細(xì)胞分裂的重點(diǎn)事件。
在生殖醫(yī)學(xué)與輔助生殖技術(shù)的快速發(fā)展中,卵母細(xì)胞的冷凍保存技術(shù)顯得尤為重要。然而,卵母細(xì)胞,尤其是其內(nèi)部的紡錘體結(jié)構(gòu),對(duì)低溫環(huán)境極為敏感,冷凍過程中的損傷往往影響解凍后卵母細(xì)胞的存活率及發(fā)育潛能。偏光成像技術(shù),特別是Polscope偏振光顯微成像系統(tǒng),結(jié)合了液晶可變減速器、電子成像及數(shù)碼成像技術(shù),能夠捕捉到具有雙折性特征的細(xì)胞結(jié)構(gòu),如紡錘體。紡錘體由微管等高分子物質(zhì)有序排列而成,這些物質(zhì)能夠使偏振光發(fā)生折射現(xiàn)象,從而被檢偏器捕捉并通過偏振光顯微鏡觀察。這一技術(shù)無(wú)需對(duì)細(xì)胞進(jìn)行固定和染色,能夠動(dòng)態(tài)評(píng)估卵母細(xì)胞的質(zhì)量與紡錘體的相關(guān)性,為卵母細(xì)胞冷凍保存的研究提供了新的手段。紡錘體的微管在細(xì)胞分裂過程中具有自我修復(fù)和再生的能力。美國(guó)卵母細(xì)胞紡錘體Hoechst染料
紡錘體的異??赡芘c人類衰老和疾病的發(fā)生有關(guān)。上海輔助生殖紡錘體改善分級(jí)
帕金森病是一種以多巴胺能神經(jīng)元丟失為主要特征的神經(jīng)退行性疾病,其主要病理特征是α-突觸蛋白的異常聚集。研究表明,紡錘體功能障礙在帕金森病的發(fā)生和發(fā)展中也起著重要作用。帕金森病患者中,微管蛋白的突變和異常磷酸化會(huì)影響微管的穩(wěn)定性和紡錘體的組裝,導(dǎo)致染色體分離異常和細(xì)胞周期紊亂。紡錘體功能障礙會(huì)影響線粒體的正常運(yùn)輸和分布,導(dǎo)致線粒體功能障礙,進(jìn)一步加劇神經(jīng)元的損傷和死亡。紡錘體功能障礙會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞周期紊亂,增加細(xì)胞凋亡的風(fēng)險(xiǎn),加速神經(jīng)元的丟失。上海輔助生殖紡錘體改善分級(jí)