RPMI-1640細(xì)胞培養(yǎng)基RPMI-1640是Moore等人于1967年在美國紐約州法羅市的羅斯韋爾公園紀(jì)念研究所（RoswellParkMemorialInstitute,RPMI）開發(fā)出來的，RPMI是該研究所開發(fā)的一類細(xì)胞培養(yǎng)基，1640是培養(yǎng)基代號(hào)。RPMI-1640是改進(jìn)型的McCoy‘s5A培養(yǎng)基，采用碳酸氫鹽緩沖系統(tǒng)，與大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基不同的是其典型的PH8的配方。RPMI-1640培養(yǎng)基**初是為淋巴細(xì)胞培訓(xùn)專門設(shè)計(jì)的，現(xiàn)在已普遍應(yīng)用于各種正常細(xì)胞和惡性**的培養(yǎng)，包括HeLa細(xì)胞、Jurkat細(xì)胞、MCF-7細(xì)胞、PC12細(xì)胞、PBMC細(xì)胞、星形膠質(zhì)細(xì)胞和惡性**，是采用極其普遍的培養(yǎng)基之一。RPMIRPMI1640培養(yǎng)基相比之下其他培養(yǎng)基之所以具與眾不同的功效，是因?yàn)槠渲懈缓€原劑谷胱甘肽和高濃度的維他命。RPMI1640培養(yǎng)基包含生物素、維他命B12以及PABA，這些成份是Eagle’sMEM和DMEM所不具備的。針對(duì)普遍的細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，我們提供多種組分的RPMI1640改進(jìn)培養(yǎng)基。William’s E培養(yǎng)基主要用于大鼠肝上皮細(xì)胞的長期培養(yǎng)，也可用于其他哺乳動(dòng)物的肝細(xì)胞培養(yǎng)。安徽實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測

    Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）是由Ham在1969年以Ham’sF-10營養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的，初用于CHO細(xì)胞的無血清培養(yǎng)。Ham’sF-12常作為無血清培養(yǎng)的基礎(chǔ)培養(yǎng)液，在低血清含量下時(shí)，特別適合單細(xì)胞培養(yǎng)和克隆化培養(yǎng)，添加血清后也廣泛應(yīng)用于細(xì)胞和原代細(xì)胞的培養(yǎng)，如大鼠肝細(xì)胞、大鼠前列腺上皮細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、大鼠成肌細(xì)胞、雞胚胎細(xì)胞等。此外，Ham’sF-12與DMEM等體積混合后，得到的DMEM/F12培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富，使用更為較廣。Ham’sF-12營養(yǎng)混合物（Ham’sF-12NutrientMixture）L-谷氨酰胺（Glutamine）是細(xì)胞培養(yǎng)中所必需的一種營養(yǎng)元素，但其在溶液中不穩(wěn)定，會(huì)自發(fā)降解，不含L-谷氨酰胺的培養(yǎng)基，可以根據(jù)研究需要任意調(diào)整L-谷氨酰胺的用量，在使用時(shí)添加新鮮的L-谷氨酰胺或其替代物更利于細(xì)胞的生長。 浙江實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基MEM α培養(yǎng)基是一種改良的MEM培養(yǎng)基，與MEM培養(yǎng)基相比MEM α培養(yǎng)基營養(yǎng)更為豐富。

    細(xì)胞培養(yǎng)基的種類很多，按其來源分為合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基（目前使用的培養(yǎng)基絕大部分是合成培養(yǎng)基），按其物質(zhì)狀態(tài)分為干粉培養(yǎng)基和液體培養(yǎng)基兩類。干粉培養(yǎng)基需由實(shí)驗(yàn)者自己配制并滅菌，液體培養(yǎng)基由專業(yè)商家提供，用戶可直接使用，非常方便。1、合成培養(yǎng)基的主要成分有：氨基酸、碳水化合物、無機(jī)鹽、維生素及其它輔助物質(zhì)：氨基酸氨基酸是組成蛋白質(zhì)的基本單位。不同種類的細(xì)胞對(duì)氨基酸的要求各異，但有幾種氨基酸細(xì)胞自身不能合成，必須依靠培養(yǎng)液提供，這幾種氨基酸稱為必需氨基酸。其中谷氨酰胺是細(xì)胞合成核酸和蛋白質(zhì)必需的氨基酸，在缺少谷氨酰胺時(shí)，細(xì)胞生長不良而死亡。因此，各種培養(yǎng)液中都有較大量的谷氨酰胺。但是，由于谷氨酰胺在溶液中很不穩(wěn)定，應(yīng)置于-20℃冰箱中保存，在使用前加入培養(yǎng)液內(nèi)。已含谷氨酰胺的培養(yǎng)液在4℃冰箱中儲(chǔ)存2周以上時(shí)，還應(yīng)重新加入原來量的谷氨酰胺。碳水化合物碳水化合物是細(xì)胞生長主要能量來源，其中有的是合成蛋白質(zhì)和核酸的成分。主要有葡萄糖、核糖、脫氧核糖和醋酸等。無機(jī)鹽培養(yǎng)液中無機(jī)鹽的主要功能是幫助細(xì)胞維持滲透壓平衡。此外，通過提供鈉，鉀和鈣離子，幫助細(xì)胞調(diào)節(jié)細(xì)胞膜功能。

    培養(yǎng)液的滲透壓是一個(gè)非常重要的因素,細(xì)胞通?？赡褪?60mOsm/kg～320mOsm/kg。標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液的滲透壓在此范圍內(nèi)波動(dòng)。特別注意：向培養(yǎng)液中加入其它物質(zhì)有可能會(huì)明顯改變培養(yǎng)液的滲透壓，特別是溶于強(qiáng)酸或強(qiáng)堿中的物質(zhì)。向培養(yǎng)液中添加HEPES時(shí)需按以下方法調(diào)節(jié)鈉離子濃度。緩沖系統(tǒng)大多數(shù)細(xì)胞所需pH在-。但是，細(xì)胞培養(yǎng)適pH值隨培養(yǎng)的細(xì)胞種類不同而不同。成纖維細(xì)胞喜歡較高pH(-),而傳代轉(zhuǎn)化細(xì)胞系則需要偏酸pH(-)。由于多數(shù)培養(yǎng)液靠碳酸氫鈉（NaHCO3）與CO2體系進(jìn)行緩沖，因此，氣相中的CO2濃度應(yīng)與培養(yǎng)液中碳酸氫鈉濃度相平衡。如果氣相或培養(yǎng)箱空氣中CO2濃度設(shè)定在5％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為；如果CO2濃度維持在10％，培養(yǎng)液中NaHCO3的加入量為。細(xì)胞培養(yǎng)瓶蓋不應(yīng)擰得太緊，以保證氣體交換。HEPES是一種非離子緩沖液，在pH-范圍內(nèi)具有較好的緩沖能力，但是非常昂貴，在高濃度時(shí)對(duì)一些細(xì)胞可能有毒。HEPES緩沖液可與低水平的碳酸鈉（）共用，以抵消因額外加入HEPES引起的滲透壓增加。在這種培養(yǎng)條件下，細(xì)胞培養(yǎng)瓶的蓋子應(yīng)擰緊，以防止培養(yǎng)液中所需的少量碳酸鹽散入空氣中。大多數(shù)培養(yǎng)液中含有酚紅作為pH指示劑，酸性培養(yǎng)液呈橙黃色，堿性培養(yǎng)液呈深紅色。針對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用，我們提供多種組分的RPMI1640改良培養(yǎng)基。

    1.細(xì)胞培養(yǎng)基的種類按照細(xì)胞培養(yǎng)基的發(fā)展歷史，細(xì)胞培養(yǎng)基大致可分為平衡鹽溶液、天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基、無血清細(xì)胞培養(yǎng)基、限定化學(xué)成分細(xì)胞培養(yǎng)基等幾大種類。（balancedsaltsolution，BSS）BSS主要是由無機(jī)鹽、葡萄糖組成，它的作用是維持細(xì)胞滲透壓平衡，保持pH穩(wěn)定及提供簡單的營養(yǎng)。其主要用于細(xì)胞的漂洗、配制其他試劑等。幾種常用的BSS配方如下（表1-1）。D-Hank's與Hank's的一個(gè)主要區(qū)別是前者不含有Ca2+和Mg2+，因此D-Hank's常用于配制胰酶溶液。因?yàn)镃a2+、Mg2+是細(xì)胞膜的重要組成成份，參與細(xì)胞粘附等功能，使用不含Ca2+、Mg2+的BSS可避免細(xì)胞結(jié)團(tuán)。此外，Hanks液和Earle液是常用的BSS基礎(chǔ)溶液，前者緩沖能力較弱，適合于密閉培養(yǎng)；后者緩沖能力較強(qiáng)，適合于5%CO2的培養(yǎng)條件。天然培養(yǎng)基指來自動(dòng)物體液或利用組織分離提取的一類培養(yǎng)基，如血漿、血清、雞胚浸出液等。其優(yōu)點(diǎn)是營養(yǎng)成分豐富，培養(yǎng)效果良好，但缺點(diǎn)是成分復(fù)雜，來源受限且制作過程復(fù)雜、批間差異大。目前使用的天然培養(yǎng)基是血清，另外各種組織提取液、促進(jìn)細(xì)胞貼壁的膠原類物質(zhì)在培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也是必不可少。水解乳蛋白是乳白蛋白經(jīng)蛋白酶和肽酶水解的產(chǎn)物。Ham’s F-12營養(yǎng)混合物（Ham’s F-12 Nutrient Mixture）是由Ham以Ham’s F-10營養(yǎng)混合物為基礎(chǔ)設(shè)計(jì)而成的。貴州華晨陽細(xì)胞培養(yǎng)基源頭直供

DMEM/F12：經(jīng)典雙培養(yǎng)基配方，為各類細(xì)胞提供均衡營養(yǎng)與穩(wěn)定生長環(huán)境。安徽實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測

在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)踐中，選擇合適的 DMEM 培養(yǎng)基至關(guān)重要。對(duì)于生長較快、粘附性低的細(xì)胞，如某些腫瘤細(xì)胞和雜交瘤細(xì)胞，高糖型 DMEM 培養(yǎng)基是理想之選，其高濃度葡萄糖能充分滿足這類細(xì)胞對(duì)能量的高需求，促進(jìn)細(xì)胞快速生長。而對(duì)于一些原代細(xì)胞，因其對(duì)培養(yǎng)環(huán)境更為敏感，可能需要低糖型 DMEM 培養(yǎng)基，并根據(jù)細(xì)胞來源和特性添加特定的生長因子、營養(yǎng)補(bǔ)充劑等，定制專屬培養(yǎng)方案，為原代細(xì)胞提供**適宜的生長條件，提高原代細(xì)胞培養(yǎng)的成功率。安徽實(shí)驗(yàn)細(xì)胞培養(yǎng)基檢測

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