Cell Counting Kit-8（CCK-8試劑盒）是由日本同仁化學(xué)研究所（Dojindo）開發(fā)的檢測(cè)細(xì)胞增殖、細(xì)胞毒性的試劑盒，為MTT法的替代方法，試劑盒中采用自己開發(fā)的水溶性四唑鹽-WST-8，在日本，美國(guó)，歐洲等國(guó)家地區(qū)均持有專利，同仁化學(xué)研究所于2006年在中國(guó)獲得了WST-8的注冊(cè)商標(biāo)。

CCK-8法與普通的MTT法相比，具有特點(diǎn)：

★靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好

★操作簡(jiǎn)便，省時(shí)省力

★水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細(xì)胞

★無需放射性同位素和有機(jī)溶劑，對(duì)細(xì)胞毒性低

★為1瓶溶液，毋需預(yù)制，即開即用

★適合于高通量篩選

CCK-8用途：篩選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、藥敏試驗(yàn)

CCK-8試劑盒在國(guó)內(nèi)知名科研院所、重點(diǎn)大學(xué)、三甲醫(yī)院被廣泛應(yīng)用，國(guó)際認(rèn)可度高，使用CCK-8發(fā)表的中外文獻(xiàn)達(dá)600多篇，其中截止08年底SCI影響因子IF>10分的論文有37篇，比較高IF26.5分。 CCK-8的檢測(cè)靈敏度高于其他方法.南京成纖維細(xì)胞增殖染色

有機(jī)溶劑溶解）好好好產(chǎn)品性狀粉末2瓶溶液溶液1瓶溶液使用方法配成溶液后使用現(xiàn)配現(xiàn)用即開即用即開即用檢測(cè)靈敏度高很高很高高檢測(cè)時(shí)間較長(zhǎng)較短較短**短檢測(cè)波長(zhǎng)560-600nm420-480nm420-480nm430-490nm細(xì)胞毒性高，細(xì)胞形態(tài)完全消失很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低，細(xì)胞形態(tài)不變很低，細(xì)胞形態(tài)不變?cè)噭┓€(wěn)定性一般較差一般很好批量樣品檢測(cè)可以非常適合非常適合非常適合便捷程度一般便捷便捷非常便捷二、CCK8檢測(cè)細(xì)胞增殖/毒性的方法實(shí)驗(yàn)一：細(xì)胞增殖分析1、制備細(xì)胞懸液：細(xì)胞計(jì)數(shù)2、接種到96孔板中：根據(jù)合適的鋪板細(xì)胞數(shù)，每孔約100ul細(xì)胞懸液，同樣的樣本可做3個(gè)重復(fù)。3、37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)：細(xì)胞接種后貼壁大約需要培養(yǎng)2-4小時(shí)，如果不需要貼壁，這步可以省去。4、加入10ulCCK8：由于每孔加入CCK8量比較少，有可能因試劑沾在孔壁上而帶來誤差，建議在加完試劑后輕輕敲擊培養(yǎng)板以幫助混勻。或者直接配置含10%CCK8的培養(yǎng)基，以換液的形式加入。5、培養(yǎng)1-4小時(shí):細(xì)胞種類不同，形成的Formazan的量也不一樣。如果顯色不夠的話，可以繼續(xù)培養(yǎng)，以確認(rèn)比較好條件。特別是血液細(xì)胞形成的Formazan很少，需要較長(zhǎng)的顯色時(shí)間（5-6小時(shí)）。6、測(cè)定450nm吸光度：建議采用雙波長(zhǎng)進(jìn)行測(cè)定。精原細(xì)胞增殖的方法細(xì)胞增殖是生物體的重要生命特征。

從G1末期到S初期、細(xì)胞內(nèi)迅速形成DNA聚合酶及四種脫氧核苷酸。S期主要特點(diǎn)是利用G1期準(zhǔn)備的物質(zhì)條件完成DNA復(fù)制，并合成一定數(shù)量的組蛋白，供DNA形成染色體初級(jí)結(jié)構(gòu)。在S期末，細(xì)胞核DNA含量增加一倍，為細(xì)胞進(jìn)行分裂作了準(zhǔn)備。DNA復(fù)制一旦受到障礙或發(fā)生錯(cuò)誤，就會(huì)阻擋細(xì)胞的分裂或引起變異，導(dǎo)致異常細(xì)胞或畸形的發(fā)生。S期持續(xù)時(shí)間大約7～8小時(shí)。G2期DNA合成后期這一時(shí)期的主要特點(diǎn)是為細(xì)胞分裂準(zhǔn)備物質(zhì)條件。DNA合成終止，但RNA和蛋白質(zhì)合成又復(fù)旺盛，主要是組蛋白、微管蛋白、膜蛋白等的合成，為紡錘體和新細(xì)胞膜等的形成備足原料。若阻斷這些合成，細(xì)胞便不能進(jìn)入有絲分裂。G2期歷時(shí)較短而恒定，哺乳動(dòng)物細(xì)胞一般為1～1.5小時(shí)。

RIPA細(xì)胞裂解液

RIPA裂解液是較可靠的緩沖液之一，其主要成分含1% NP-40, 0.5% Sodium deoxycholate, 0.1% SDS，該緩沖液能夠從細(xì)胞質(zhì)，膜和核蛋白質(zhì)中提取蛋白質(zhì)，并且與許 多應(yīng)用相容，包括蛋白質(zhì)分析，和蛋白質(zhì)純化。RIPA緩沖液不含蛋白酶或磷酸酶，如果需要，可將酶添加到試劑中以防止蛋白質(zhì)水解并維持蛋白質(zhì) 的磷酸化狀態(tài)。一些蛋白激酶和其他酶可能對(duì)RIPA緩沖液的組分敏感，導(dǎo)致其活性降低。 在這種情況下，準(zhǔn)備不含脫氧膽酸鈉和SDS的RIPA緩沖液。

注意事項(xiàng)：

1.抽提蛋白的所有步驟都需在冰上或4℃進(jìn)行。

2.裂解得到的蛋白樣品，含有較高濃度的去垢劑，不建議用Bradford 法測(cè)定蛋白濃度，可以選用BCA蛋白定量試劑盒測(cè)定蛋白濃度。

3.裂解產(chǎn)物中經(jīng)常會(huì)出現(xiàn)一小團(tuán)透明膠狀物，屬正?，F(xiàn)象。該透明膠狀物為含有基因組DNA等的復(fù)合物。在不檢測(cè)和基因組DNA結(jié)合特別緊密的蛋白的情況下，可以直接離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)；如果需要檢測(cè)和基因組結(jié)合特別緊密的蛋白，則可以通過超聲處理打碎打散該透明膠狀物，隨后離心取上清用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如果檢測(cè)一些常見的轉(zhuǎn)錄因子，例如NFKB、p53等時(shí)，通常不必進(jìn)行超聲處理，就可以檢測(cè)到這些轉(zhuǎn)錄因子。 CCK法的檢測(cè)靈敏度很高，甚至可以測(cè)定較低細(xì)胞密度。

T細(xì)胞增殖試驗(yàn)類型(1)形態(tài)法：其原則是將外周血液或分離的單個(gè)細(xì)胞與適量的植物血凝素(PHA)混合，置37℃培養(yǎng)72h，取培養(yǎng)細(xì)胞作涂片染色鏡檢。據(jù)細(xì)胞的大小、核與胞漿的比例、胞漿的染色性和核結(jié)構(gòu)以及有無核仁等特征，分別計(jì)數(shù)淋巴母細(xì)胞、過渡性母細(xì)胞和核有絲分裂相以及成熟的小淋巴細(xì)胞，以前三者為轉(zhuǎn)化細(xì)胞，每份標(biāo)本計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞，計(jì)算轉(zhuǎn)化率。  (2)核素法：絕大多數(shù)外周血T細(xì)胞通產(chǎn)處于細(xì)胞周期的G0期，受特異性抗原或促有絲分裂原后，從G0期進(jìn)入G1期，開始合成蛋白質(zhì)、RNA和DNA前體物質(zhì)等，為DNA復(fù)制準(zhǔn)備物質(zhì)基礎(chǔ)，然后進(jìn)入S期，細(xì)胞合成DNA量倍增，此時(shí)若在培養(yǎng)液中加入3H標(biāo)記的TdR，后者摻入新合成的DNA中，據(jù)摻入的多少推測(cè)細(xì)胞增殖程度。機(jī)體創(chuàng)傷愈合、組織再生、病理組織修復(fù)等，都要依賴細(xì) 胞增殖。沈陽(yáng)tnk細(xì)胞增殖毒性測(cè)定試劑盒

細(xì)胞增殖的研發(fā)途徑。南京成纖維細(xì)胞增殖染色

上海儒安生物科技有限公司轉(zhuǎn)膜液

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

我們生產(chǎn)的Western轉(zhuǎn)膜液(Western Transfer Buffer)可以用于Western時(shí)濕法電轉(zhuǎn)膜，是一種快速效率高的特有配方轉(zhuǎn)膜液，效果較好。

轉(zhuǎn)印快速——室溫轉(zhuǎn)膜，20-30 分鐘內(nèi)將蛋白轉(zhuǎn)移到印跡膜上。

轉(zhuǎn)印效率高——產(chǎn)生熱量非常小，減少蛋白損失。

配置靈活——配置1*轉(zhuǎn)膜液時(shí)加入無水甲醇、無水乙醇均可，效果沒有明顯差異，兼容性好。

使用方法：

 1* 快速轉(zhuǎn)膜液的配制(1000 ml)：

 取100ml 此產(chǎn)品+800 ml 去離子水+100ml甲醇。

電轉(zhuǎn)儀的設(shè)置：

一個(gè)轉(zhuǎn)印槽：電壓：110V,  電流：400mA；

二個(gè)轉(zhuǎn)印槽：電壓：140V，電流：700mA；

100kD 以下蛋白，膠濃度＜10%的，轉(zhuǎn)印時(shí)間20分鐘即可轉(zhuǎn)印完畢。

100kD 以上蛋白，膠濃度≥10%的，轉(zhuǎn)印時(shí)間30分鐘即可轉(zhuǎn)印完畢。南京成纖維細(xì)胞增殖染色

上海儒安生物科技有限公司位于真南路4268號(hào)2幢J1718室，交通便利，環(huán)境優(yōu)美，是一家生產(chǎn)型企業(yè)。公司是一家有限責(zé)任公司企業(yè)，以誠(chéng)信務(wù)實(shí)的創(chuàng)業(yè)精神、專業(yè)的管理團(tuán)隊(duì)、踏實(shí)的職工隊(duì)伍，努力為廣大用戶提供高品質(zhì)的產(chǎn)品。以滿足顧客要求為己任；以顧客永遠(yuǎn)滿意為標(biāo)準(zhǔn)；以保持行業(yè)優(yōu)先為目標(biāo)，提供高品質(zhì)的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體。上海儒安生物科技順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求，通過高端技術(shù)，力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑，ecl發(fā)光液，cck8細(xì)胞增殖，內(nèi)參抗體。