微生物鑒定系統(tǒng):微生物鑒定系統(tǒng)的工作原理因不同的儀器和系統(tǒng)而異。不同的細(xì)菌對(duì)底物的反應(yīng)不同是生化反應(yīng)鑒定細(xì)菌的基礎(chǔ),而試驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確度取決于鑒定系統(tǒng)配套培養(yǎng)基的制備方法、培養(yǎng)物濃度、孵育條件和結(jié)果判定等。大多微生物鑒定系統(tǒng)采用細(xì)菌分解底物后反應(yīng)液中pH的變化,色原性或熒光原性底物的酶解,測(cè)定揮發(fā)或不揮發(fā)酸,或識(shí)別是否生長(zhǎng)等方法來(lái)分析鑒定細(xì)菌。藥敏試驗(yàn)分析系統(tǒng)的基本原理是將微量稀釋在條孔或條板中,加入菌懸液孵育后放入儀器或在儀器中直接孵育,通過(guò)測(cè)定細(xì)菌生長(zhǎng)的濁度,或測(cè)定培養(yǎng)基中熒光指示劑的強(qiáng)度或熒光原性物質(zhì)的水解,觀察細(xì)菌的生長(zhǎng)情況。在含有培養(yǎng)基中,濁度的增加。一般來(lái)說(shuō),在一定的培養(yǎng)條件下,同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。廣州隨機(jī)PCR病毒檢測(cè)服務(wù)
微生物檢測(cè)崗位的主要職責(zé):1.負(fù)責(zé)產(chǎn)品無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、細(xì)菌內(nèi)檢查、支原體及外源病毒的分析方法開(kāi)發(fā)、驗(yàn)證;2.對(duì)產(chǎn)品及環(huán)境實(shí)施無(wú)菌檢查、微生物限度檢查、細(xì)菌內(nèi)檢查;3.對(duì)原輔料、內(nèi)包材、工藝用水等實(shí)施微生物限度、細(xì)菌內(nèi)檢查;4.對(duì)微生物實(shí)驗(yàn)室的試劑、耗材、儀器等實(shí)施日常管理;5.對(duì)實(shí)驗(yàn)室菌種管理、進(jìn)行培養(yǎng)基的促生長(zhǎng)試驗(yàn)、無(wú)菌試驗(yàn)的陽(yáng)性對(duì)照試驗(yàn);6.進(jìn)行潔凈區(qū)日常環(huán)境監(jiān)控及無(wú)菌區(qū)人員更衣確認(rèn);7.對(duì)關(guān)鍵檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行定期的趨勢(shì)分析;8.完成上級(jí)安排的其他事宜。廣州隨機(jī)PCR病毒檢測(cè)服務(wù)生化方法檢測(cè)病原微生物實(shí)際上是測(cè)定微生物特異性酶。
未知病原微生物樣本要經(jīng)歷:核酸純化-文庫(kù)構(gòu)建-生物信息學(xué)分析這三大基本流程才能完成鑒定。高通量測(cè)序技術(shù)之解決疑難鑒定問(wèn)題并提高檢測(cè)的靈敏度,在病原微生物檢測(cè)與鑒定方面,對(duì)一些非典型癥狀的樣品,依靠先驗(yàn)知識(shí)與傳統(tǒng)檢測(cè)方法無(wú)法有效對(duì)病原微生物進(jìn)行檢測(cè)時(shí),高通量測(cè)序技術(shù)通過(guò)對(duì)基因組進(jìn)行全序列測(cè)序,可有效檢測(cè)出在某種材料中可能攜帶的之前未報(bào)道過(guò)的病原微生物,或鑒定出混合侵染樣品中的不同病原分離物,降低有害生物傳入的風(fēng)險(xiǎn)。相對(duì)傳統(tǒng)的生物學(xué)、血清學(xué)與分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù),高通量測(cè)序技術(shù)具有更高的特異性和靈敏性,即使在樣品中病原微生物存在量較低的情況下依然能夠做出快速、準(zhǔn)確的檢測(cè),尤其適用于病原微生物侵染初期的樣品材料的檢測(cè)。
傳統(tǒng)病原微生物檢測(cè)方法是什么?傳統(tǒng)病原微生物檢測(cè)方法是生化方法。生化方法檢測(cè)病原微生物實(shí)際上是測(cè)定微生物特異性酶。由于各種微生物所具有的酶系統(tǒng)不完全相同,對(duì)許多物質(zhì)的分解能力亦不一致。因此可利用不同底物產(chǎn)生的不同代謝產(chǎn)物來(lái)間接檢測(cè)該微生物內(nèi)酶的有無(wú),從而達(dá)到檢測(cè)特定微生物的目的。如沙門氏菌能產(chǎn)生辛酯酶,這一性能是除沙門氏菌外的各屬腸桿菌科細(xì)菌所不具備的。根據(jù)這一特性,甄宏太等報(bào)道了快速檢測(cè)沙門氏菌的辛酯酶法。大腸埃希氏菌具β2葡萄糖醛酸酶,但以O(shè)157:H7為腸出血性大腸埃希氏菌(EHEC)卻不具此酶,故β2葡萄糖醛酸酶陰性已成為初步篩查EHEC的重要特征。微生物檢測(cè)方法中常用的有平板菌落計(jì)數(shù)法。
微生物檢測(cè)方法中的比濁法是根據(jù)菌懸液的透光量間接地測(cè)定細(xì)菌的數(shù)量。細(xì)菌懸浮液的濃度在一定范圍內(nèi)與透光度成反比,與光密度成正比,所以,可用光電比色計(jì)測(cè)定菌液,用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。此法簡(jiǎn)便快捷,但只能檢測(cè)含有大量細(xì)菌的懸浮液,得出相對(duì)的細(xì)菌數(shù)目,對(duì)顏色太深的樣品,不能用此法測(cè)定。測(cè)定細(xì)胞重量法此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后將濕菌體進(jìn)行稱重;干重法系單位體積培養(yǎng)物經(jīng)離心后,以清水洗凈放人干燥器加熱烘干,使之失去水分然后稱重。此法適于菌體濃度較高的樣品,是微生物檢測(cè)的一種常用方法。傳統(tǒng)的微生物檢測(cè)方法:鑒別培養(yǎng)基,根據(jù)微生物的代謝特點(diǎn),在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品。廣州隨機(jī)PCR病毒檢測(cè)服務(wù)
病毒由一個(gè)核酸長(zhǎng)鏈和蛋白質(zhì)外殼構(gòu)成。廣州隨機(jī)PCR病毒檢測(cè)服務(wù)
病毒鑒定常用方法:病原學(xué)檢測(cè)主要適用于急性期血液標(biāo)本,一般認(rèn)為發(fā)病7天內(nèi)檢測(cè)陽(yáng)性率高。(1)核酸檢測(cè):采用熒光定量RT-PCR方法,是目前早期診斷寨卡病毒病的主要檢測(cè)手段。(2)病毒分離:將標(biāo)本接種于蚊源細(xì)胞(C6/36)或哺乳動(dòng)物細(xì)胞(BHK21、Vero)進(jìn)行分離培養(yǎng),出現(xiàn)病變以后,用檢測(cè)核酸的方法鑒定病毒。也可使用乳鼠腦內(nèi)接種進(jìn)行病毒分離。血清學(xué)檢測(cè):(1)血清特異性IgM抗體:發(fā)病3天后可檢出病毒特異IgM抗體,但發(fā)病7天后檢出率高??刹捎肊LISA、免疫熒光等方法檢測(cè)。IgM抗體陽(yáng)性,提示患者可能新近寨卡病毒,但寨卡病毒IgM抗體與登革病毒、黃熱病毒和西尼羅病毒等黃病毒有較強(qiáng)的交叉反應(yīng),易于產(chǎn)生假陽(yáng)性。(2)中和抗體:采用空斑減少中和試驗(yàn)方法檢測(cè)?;颊呋謴?fù)期血清中和抗體陽(yáng)轉(zhuǎn)或滴度較急性期呈4倍及以上升高,且排除登革、乙腦等其他常見(jiàn)黃病毒,可以確診。廣州隨機(jī)PCR病毒檢測(cè)服務(wù)