流式細(xì)胞檢測工作原理是在細(xì)胞分子水平上通過單克隆抗體對單個細(xì)胞或其他生物粒子進(jìn)行多參數(shù)、快速的定量分析。它可以高速分析上萬個細(xì)胞,并能同時從一個細(xì)胞中測得多個參數(shù),具有速度快、精度高、準(zhǔn)確性好的優(yōu)點(diǎn),是當(dāng)代先進(jìn)的細(xì)胞定量分析技術(shù)之一,下面就由上海東寰給大家簡要介紹。光源、液流通路、信號檢測傳輸和數(shù)據(jù)的分析系統(tǒng)是流式細(xì)胞儀的主要組成。目前臨床中運(yùn)用流式細(xì)胞儀進(jìn)行外周血白細(xì)胞、骨髓細(xì)胞等檢測是臨床檢測的重要組成部分。流式細(xì)胞儀主要由四部分組成。它們是:流動室和液流系統(tǒng);激光源和光學(xué)系統(tǒng);光電管和檢測系統(tǒng);計算機(jī)和分析系統(tǒng)。上圖為其結(jié)構(gòu)示意圖。流動室由樣品管、鞘液管和噴嘴等組成,常用光學(xué)玻璃...
同時還有生殖、發(fā)育毒性。可通過皮膚吸收及呼吸道進(jìn)入人體,因此,在搬運(yùn)和使用中必須穿戴好防護(hù)用具,如防毒服,防毒口罩及防毒手套等。毒性級別:★★★★實(shí)驗(yàn)場景:用于催化過硫酸銨產(chǎn)生自由基,從而加速丙烯酰胺凝膠的聚合。防護(hù)攻略:強(qiáng)神經(jīng)毒性,防止誤吸,操作時快速,存放時密封。毒性級別:★★★實(shí)驗(yàn)場景:免疫印跡實(shí)驗(yàn)中,樣品緩沖液中需加入DTT二硫蘇糖醇,能使樣品蛋白半胱氨酸殘基之間的二硫鍵斷裂,分子被解聚成組成它們的多肽鏈。防護(hù)攻略:有很強(qiáng)的還原劑,散發(fā)難聞的氣味。可因吸入、咽下或皮膚吸收而危害健康。當(dāng)使用固體或高濃度儲存液時,戴手套和護(hù)目鏡,在通風(fēng)櫥中操作。(Ethidiumbromide,溴...
原理以慢病毒包裝為例,主要包括3個質(zhì)粒:質(zhì)粒DNA可以轉(zhuǎn)錄出慢病毒遺傳物質(zhì)(RNA),但不能翻譯出慢病毒的外殼及蛋白成分的載體質(zhì)粒,其同時含有目的基因和報告基因,psPAX2是可以表達(dá)慢病毒外殼的質(zhì)粒,其表達(dá)產(chǎn)物可通過粘附機(jī)制更易穿過細(xì)胞膜。為慢病毒的膜蛋白質(zhì)粒,通過脂質(zhì)體進(jìn)行三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)到靶細(xì)胞基因組中,宿主基因組在表達(dá)時,隨宿主基因轉(zhuǎn)錄出的目的基因RNA與psPAX2、基因翻譯出的蛋白組裝為慢病毒。病毒進(jìn)入細(xì)胞后,其遺傳物質(zhì)RNA逆轉(zhuǎn)錄出DNA,該基因再整合到靶細(xì)胞的基因組中,完成轉(zhuǎn)染過程。因?yàn)橘|(zhì)粒DNA只能轉(zhuǎn)錄出病毒RNA和表達(dá)目的基因卻不能表達(dá)出病毒的外殼和膜蛋白成分,因此其不能...
上期我們主要講解了細(xì)胞凋亡的早期檢測方法,這期主要講解一下細(xì)胞凋亡晚期中,核酸內(nèi)切酶(某些Caspase的底物)在核小體之間剪切核DNA,產(chǎn)生大量長度在180-200bp的DNA的片段。1、凋亡DNALadder檢測試劑盒細(xì)胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進(jìn)行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細(xì)胞群中可觀察到典型的DNAladder。QuickApoptoticDNALadderDetectionKit可以快速(約1-2小時)、靈敏地檢測凋亡細(xì)胞中的DNA的片段。2、TUNEL-basedDNA的片段分析試劑盒細(xì)胞凋亡中,染色體DNA雙鏈斷裂或單鏈斷裂而產(chǎn)生大量的粘性3'-OH末...
具體選用何種培養(yǎng)器皿取決于細(xì)胞生長密度需求(啟動正常生長所需的密度)。二.細(xì)胞換液培養(yǎng)1、全量換液:把所有的舊培養(yǎng)液移除,加入新的培養(yǎng)液(加入培養(yǎng)基的量根據(jù)細(xì)胞的密度和生長速度);2、半量換液:把舊培養(yǎng)液移至15ml離心管中,然后在培養(yǎng)器皿中加入適量新培養(yǎng)基(避免細(xì)胞離開培養(yǎng)液太久),把裝有舊培養(yǎng)液的離心管進(jìn)行離心(1000RPM,10min),離心后取適量舊培養(yǎng)上清至培養(yǎng)器皿中。注意事項(xiàng)1.全量換液適合于生長較快的腫瘤細(xì)胞,因?yàn)檫@些細(xì)胞可在短期內(nèi)分泌足夠的因子來支撐其生長;2.半量換液主要適合于生長較慢的原代細(xì)胞和干細(xì)胞,這些細(xì)胞很難在短期內(nèi)分泌足夠的因子來支撐其生長,舊培養(yǎng)液中恰好...
染方法大致可分為物理介導(dǎo)(如電穿孔法、顯微注射和基因等)、化學(xué)介導(dǎo)(脂質(zhì)體及其代替物、磷酸鈣等)和生物介導(dǎo)(各類病毒,包括腺病毒、慢病毒、逆轉(zhuǎn)錄病毒、腺相關(guān)病毒等)三類途徑。細(xì)胞轉(zhuǎn)染又分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,瞬時轉(zhuǎn)染是指外源基因進(jìn)入受體細(xì)胞后,存在于游離的載體上,不整合到細(xì)胞的染色體上,基因表達(dá)維持時間較短,通常在96h以內(nèi);穩(wěn)定轉(zhuǎn)染是指DNA整合到宿主細(xì)胞的染色體中,使宿主細(xì)胞可長期表達(dá)目的基因。目前,大多采用依據(jù)不同質(zhì)粒載體含有的抗性標(biāo)志選用相應(yīng)的對靶細(xì)胞進(jìn)行篩選,常用的有嘌呤霉素(Puromycin)、G418(Geneticin)等。1、主要有下面幾種化學(xué)法:磷酸鈣法、DEAE...