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廣州支原體去除試劑貨期

來源： 發(fā)布時(shí)間：2024-06-29

支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會(huì)對細(xì)胞的生長狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑，它通過與支原體膜特異性結(jié)合，改變支原體膜的通透性，從而導(dǎo)致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會(huì)對細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響，但由于它不能穿過真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此不會(huì)改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清*后，細(xì)胞在后續(xù)的傳代過程中能快速恢復(fù)其正常的生長和增殖狀態(tài)，細(xì)胞后續(xù)的生長增殖幾乎無影響。
此外，該產(chǎn)品不含抗*素，不會(huì)使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng)，細(xì)胞毒性小。然而，需要注意的是，不同細(xì)胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異，可以根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞量和處理?xiàng)l件。在某些情況下，如果出現(xiàn)細(xì)胞變形、生長緩慢等現(xiàn)象，可以更換成標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液終止作用，或者調(diào)整去除試劑的使用濃度和作用時(shí)間。
支原體檢測方法qPCR法的應(yīng)用。廣州支原體去除試劑貨期

在科研中，支原體檢測是確保細(xì)胞培養(yǎng)純凈性的重要環(huán)節(jié)。以下是一些在科研中常見的支原體檢測方法：
1. 支原體培養(yǎng)法：這是一種傳統(tǒng)的檢測方法，通過將細(xì)胞培養(yǎng)物接種到特定的培養(yǎng)基中，觀察是否有支原體生長。這是直接的檢測方法，但耗時(shí)較長，通常需要數(shù)周時(shí)間。
2. DNA染色法：使用熒光染料（如Hoechst或DAPI）染色細(xì)胞核，然后通過熒光顯微鏡觀察。這種方法操作簡便，可以快速得到結(jié)果，但特異性不高，可能會(huì)有假陽性。
3. 聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）法：這是一種分子生物學(xué)技術(shù)，通過設(shè)計(jì)特異性的引物，擴(kuò)增支原體DNA，從而檢測支原體的存在。PCR法具有高靈敏度和特異性，已成為日常細(xì)胞培養(yǎng)維護(hù)的可靠方法。
4. 核酸擴(kuò)增技術(shù)（NAT）：NAT技術(shù)通過擴(kuò)增并檢測特定的支原體基因組保守序列來進(jìn)行支原體污染檢測，具有快速、簡便的特點(diǎn)。
廣州支原體去除試劑貨期支原體的檢測方法有哪些？

目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動(dòng)物、昆蟲和植物中，其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實(shí)驗(yàn)室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實(shí)驗(yàn)室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外，來自其他實(shí)驗(yàn)室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑；非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液；實(shí)驗(yàn)室人員；培養(yǎng)箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過度使用；細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。

支原體檢測實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和實(shí)驗(yàn)方法需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：
1. 選擇合適的檢測方法：根據(jù)實(shí)驗(yàn)室條件和需求，選擇適合的支原體檢測方法，如培養(yǎng)法、PCR法、ELISA法、DNA熒光染色法等。
2. 樣本的采集與處理：確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范，避免交叉污染。
3. 實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化：制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程，包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時(shí)間點(diǎn)等，以保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。
4. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基：根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基，如支原體肉湯培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等，并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。
5. 設(shè)置對照組：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽性對照和陰性對照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。
6. 結(jié)果的判定：根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法的不同，設(shè)定明確的標(biāo)準(zhǔn)來判定結(jié)果，如培養(yǎng)法中觀察“荷包蛋”狀菌落，PCR法中通過擴(kuò)增條帶的有無來判斷。
7. 避免抑制物質(zhì)的影響：在實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中考慮可能存在的抑制物質(zhì)，并采取適當(dāng)措施中和或抵消它們的作用。
支原體污染如何預(yù)防？

qPCR法，即定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Quantitative Polymerase Chain Reaction）法，是一種高度靈敏和特異的分子生物學(xué)技術(shù)，用于檢測和定量DNA序列。在支原體檢測中，qPCR法的原理主要包括以下幾個(gè)步驟：
1. DNA提?。菏紫葟拇郎y樣本中提取DNA，這可能包括細(xì)胞培養(yǎng)上清液或組織樣本中的支原體DNA。
2. 設(shè)計(jì)特異性引物：針對支原體的保守DNA序列，如16S rRNA基因，設(shè)計(jì)特異性的DNA引物。
3. 熒光標(biāo)記探針：使用熒光標(biāo)記的探針，該探針與目標(biāo)DNA序列互補(bǔ)，能夠在PCR擴(kuò)增過程中與擴(kuò)增的DNA結(jié)合。
4. Ct值確定：Ct值（閾值循環(huán)數(shù)）是指在PCR反應(yīng)中，熒光信號強(qiáng)度超過預(yù)定閾值的循環(huán)次數(shù)。Ct值越低，表示樣本中支原體DNA的量越多。
5. 定量分析：通過標(biāo)準(zhǔn)曲線法或相對定量法，將Ct值轉(zhuǎn)換為支原體DNA的定量結(jié)果。
qPCR法的優(yōu)勢在于其高靈敏度和特異性，能夠檢測到非常低水平的支原體污染，并且可以在短時(shí)間內(nèi)提供結(jié)果，這對于需要快速檢測的生物制品生產(chǎn)和細(xì)胞培養(yǎng)質(zhì)量控制非常重要
支原體檢測方法LAMP法的應(yīng)用。廣州支原體去除試劑貨期

支原體去除試劑使用之后，對支原體的檢測是否有影響？廣州支原體去除試劑貨期

方法

靈敏度

優(yōu)勢

劣勢

培養(yǎng)法

☆☆☆

ü 便捷

ü 便宜

ü 金標(biāo)準(zhǔn)

ü 費(fèi)勞力

ü 耗時(shí)長

ü 需要特定的培養(yǎng)基

ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基

DNA染色

(DAPI or Hoescht)

☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 可能難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 可能假陽性可能性

間接染色

☆☆☆

ü 迅速

ü 便宜

ü 易檢測

ü 費(fèi)時(shí)

ü 需要細(xì)胞系指示

ELISA

☆☆

ü 迅速

ü 客觀，易判讀結(jié)果

ü 可以鑒別支原體種屬

ü 受抗體限制

ü 價(jià)格高

免疫染色

☆☆

ü 迅速

ü 可檢測支原體種屬

ü 價(jià)格略高

ü 可檢測的支原體種屬有限

放射自顯影

☆☆

ü 迅速

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

ü 費(fèi)勞力

生物發(fā)光

☆☆

ü 迅速

ü 便捷

ü 便宜

ü 難以判讀結(jié)果

ü 無法鑒別支原體種屬

PCR

☆☆☆

ü 便宜

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

Real-Time PCR

☆☆☆

ü 便捷

ü 迅速

ü 具有特異性

ü 結(jié)果可靠

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性

ü 需要提取DNA

LAMP

☆☆

ü 便捷

ü 無需DNA提取

ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間

ü 具有特異性

ü 高通量

ü 可能假陽性可能性

ü 檢測特異性依賴引物特異性 廣州支原體去除試劑貨期
標(biāo)簽： 支原體 免疫沉淀