2018版《指導(dǎo)要求》說明外泌體沒有限定單一的分離手段,多種手段都可以進(jìn)行細(xì)胞外囊泡的富集。《指導(dǎo)要求》編寫者們認(rèn)為“高回收率,低特異性”的富集手段是指那些富集囊泡的同時(shí)會(huì)有大量的非囊泡組分被富集,甚至細(xì)胞的整個(gè)分泌組都會(huì)被摻入其中,歸入這一類的分離手段主要包括通過改變電荷或通過高聚物作用的沉淀試劑盒、低分子量截流的超濾分離、超長時(shí)間和超高離心力的超速離心等。Wako的MagCapture?ExosomeIsolationKitPS(產(chǎn)品編號(hào)299-77603(2tests),293-77601(10tests)),使用PS親和法對(duì)外泌體進(jìn)行提取,損失小且能獲得高純度的外泌體。在體內(nèi)細(xì)胞間物質(zhì)和信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用。成都外泌體提取試劑服務(wù)電話
研究表明被特定部位的細(xì)胞獲取的一些病癥外泌體可為一些病癥的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的一些病癥細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的一些病癥細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后啟動(dòng)了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。較后通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測一些病癥轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。深圳外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家外泌體的提取、分離方法:開發(fā)高效、快速、穩(wěn)定,并且保持外泌體結(jié)構(gòu)和生物功能完整性的方法。
所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對(duì)外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。
外泌體的提取、分離方法:超高速離心法。常用的是超高速離心法,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。該方法利用離心力從細(xì)胞培養(yǎng)液或生物流體獲得外泌體,經(jīng)過400×g、2000×g、10000×g的低速離心,除去細(xì)胞及大的細(xì)胞分泌物;較后超高速100000×g離心得到外泌體[12]。超高速離心因操作簡單,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對(duì)較低而被普遍使用。但是該方法耗時(shí)、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中較主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會(huì)有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。同時(shí)對(duì)超速離心機(jī)的設(shè)備要求以及操作程序的培訓(xùn)較大提高了提取成本。
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體,包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時(shí),外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式:一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合,進(jìn)而靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中,外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切,剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合,從而細(xì)胞內(nèi)的信號(hào)通路。有報(bào)道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合,非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA對(duì)外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。深圳外泌體提取試劑生產(chǎn)廠家
可以使用NanoSight?或電子顯微鏡分析純化的外泌體,以評(píng)估近似外泌體大小范圍和濃度。成都外泌體提取試劑服務(wù)電話
外泌體在肺病治病中的作用:有研究發(fā)現(xiàn),使用外泌體運(yùn)載紫杉醇(PTX)可顯著提高病細(xì)胞對(duì)PTX的吸收,將PTX加載至外泌體中顯著增加了藥物細(xì)胞毒性,Exo-PTX能顯著壓制肺病的發(fā)展。Aqil等在進(jìn)行裸鼠實(shí)驗(yàn)時(shí)發(fā)現(xiàn),加載至外泌體中的雷公藤紅素(Exo-CEL)比普通的CEL有更強(qiáng)的抗一些病癥功效,且在小鼠中未發(fā)現(xiàn)明顯全身性或系統(tǒng)性毒性,由此可以證明,外泌體制劑可以有效增強(qiáng)CEL功效并降低與劑量有關(guān)的毒性。到目前為止,外泌體在肺病治病方面的研究主要集中于免疫壓制,有效的外泌體藥物遞送平臺(tái)的搭建以及外泌體相關(guān)的潛在治病靶點(diǎn)的探索。已有的研究表明外泌體在肺病治病領(lǐng)域有著廣闊的前景,期待外泌體在肺病治病領(lǐng)域早日得到突破,造福更多的患者。成都外泌體提取試劑服務(wù)電話