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敲黑板啦,IF=31.373組織外泌體研究模板來(lái)了!

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-12-12


南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬鼓樓醫(yī)院內(nèi)分泌科畢艷教授團(tuán)隊(duì)和南京大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院張辰宇、李靚教授團(tuán)隊(duì)合作,首次發(fā)現(xiàn)外泌體可介導(dǎo)脂肪-大腦間通訊并促進(jìn)糖尿病認(rèn)知功能障礙的發(fā)生。研究成果發(fā)表在國(guó)際著名期刊《Cell Metabolism》上。

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研究背景:糖尿病顯著增加認(rèn)知障礙的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),嚴(yán)重影響老年人健康生存狀態(tài)。臨床研究表明控制血糖不能保護(hù)認(rèn)知功能,因此需要進(jìn)一步揭示糖尿病認(rèn)知功能障礙的機(jī)制,尋找治療糖尿病認(rèn)知障礙的新策略。脂肪組織外泌體作為新型脂肪因子,可參與脂肪組織與其他外周組織器官間的生物信號(hào)傳遞以及代謝調(diào)控,但能否介導(dǎo)脂肪組織與大腦信息交流的發(fā)生尚不明確。

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研究結(jié)果:作者利用脂肪移植和多種外泌體示蹤技術(shù),發(fā)現(xiàn)肝臟來(lái)源的細(xì)胞外囊泡(EVs)不能介導(dǎo)外周組織和大腦間通訊,而脂肪組織來(lái)源的EVs是形成二者通訊的重要生物學(xué)介質(zhì);在胰島素抵抗及糖尿病狀態(tài)下,脂肪組織EVs攜帶的內(nèi)容物miRNAs促進(jìn)海馬突觸丟失和認(rèn)知功能損傷。研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)一步利用小RNA測(cè)序和轉(zhuǎn)錄組測(cè)序技術(shù),識(shí)別了脂肪組織來(lái)源的EVs中造成糖尿病認(rèn)知功能損傷的系列關(guān)鍵分子,發(fā)現(xiàn)人和小鼠共有的致病分子miR-9-3p 通過(guò)靶向下調(diào)對(duì)神經(jīng)突觸功能維持至關(guān)重要的分子BDNF,造成神經(jīng)突觸丟失,進(jìn)而促進(jìn)認(rèn)知功能損傷。最后該團(tuán)隊(duì)利用病毒介導(dǎo)的基因沉默技術(shù),證實(shí)靶向脂肪組織衍生的 EVs 或其內(nèi)容物miRNAs可顯著減緩糖尿病認(rèn)知功能障礙。

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研究結(jié)論:本研究揭示了脂肪組織-大腦器官間通訊機(jī)制,闡明了脂肪組織衍生的細(xì)胞外囊泡及其內(nèi)容物miRNAs在糖尿病認(rèn)知功能障礙發(fā)生中的重要作用,為糖尿病認(rèn)知障礙的藥物干預(yù)靶點(diǎn)提供了新思路。

組織外泌體研究意義:組織外泌體(tissue-derived EVs),指由多種細(xì)胞分泌的存在于組織間隙中的外泌體。直接從組織中分離的EVs具有組織特異性、準(zhǔn)確反映組織微環(huán)境等優(yōu)點(diǎn)。

組織外泌體如何提???

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常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:

一、 產(chǎn)品試劑保存問(wèn)題:

1. Solution A2使用前后應(yīng)保存于-18℃條件下,建議分裝后使用,應(yīng)避免反復(fù)凍融;

2. Solution B2始終保存在室溫條件下即可,溫度過(guò)低可能使該溶液中出現(xiàn)白色結(jié)晶,且難以復(fù)溶(需要高溫),少量沉淀不影響提取效果。

二、 純化柱使用問(wèn)題:

1. 一般情況下,每個(gè)樣品按照說(shuō)明書(shū)操作,“3000×g(~6000 rpm)離心10 min”即可一次性純化完畢。如果上柱中仍有液體殘留,將純化柱轉(zhuǎn)換方向放置于離心機(jī)中(區(qū)別于上一次放置方向即可),再次重復(fù)離心;

2. 若通過(guò)上述操作,上柱中仍有較多液體殘留,請(qǐng)將上柱中的液體轉(zhuǎn)移至新的純化柱中,繼續(xù)重復(fù)離心操作,直至上柱液體全部轉(zhuǎn)移至下柱中。

三、 外泌體得率問(wèn)題:

一般情況下,0.1 g組織樣品(以心肌組織為例)可以提取出100~200 ug外泌體(5E+9~1E+10 Particles總量),因不同組織外泌體含量不同,得率會(huì)有一定差異。

宇玫博生物專業(yè)從事于外泌體產(chǎn)品開(kāi)發(fā)和技術(shù)服務(wù)的高科技公司。2015年成立于上海張江高科技園區(qū),是國(guó)內(nèi)較早開(kāi)展外泌體研究、服務(wù)及相關(guān)試劑開(kāi)發(fā)的專業(yè)公司,現(xiàn)已發(fā)展為專業(yè)化外泌體藥物遞送和試劑方案的供應(yīng)商。

公司擁有2000平米GMP標(biāo)準(zhǔn)廠房,高端儀器設(shè)施設(shè)備,實(shí)現(xiàn)生產(chǎn)規(guī)范化、規(guī)?;?,為進(jìn)入國(guó)際市場(chǎng)打下基礎(chǔ)。

業(yè)務(wù)范圍包括:新型藥物載體的研發(fā)、外泌體規(guī)模化提純和生產(chǎn)、外泌體診斷試劑研發(fā)、外泌體相關(guān)產(chǎn)品的銷售等,核心技術(shù)解決了外泌體規(guī)?;峒儭⑼饷隗w藥物遞送、外泌體標(biāo)記等技術(shù)難點(diǎn)。

目前已經(jīng)為諾和諾德、和元生物、吉?jiǎng)P基因、津曼特生物、清華大學(xué)、北京大學(xué)、浙江大學(xué)、復(fù)旦大學(xué)等機(jī)構(gòu)提供過(guò)外泌體產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。



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