返藍(lán)、伊紅和蘇木素染色液在病理切片制作中的先后順序解析
在病理切片制作過(guò)程中,返藍(lán)、伊紅和蘇木素染色液的運(yùn)用至關(guān)重要,它們以特定的先后順序發(fā)揮作用,共同完成對(duì)切片的染色,從而清晰展示組織的結(jié)構(gòu)和細(xì)胞特征。
蘇木素染色:細(xì)胞核的著色
蘇木素染色是病理切片染色的起始步驟。將脫蠟至水后的切片放入蘇木素染液中,染色時(shí)間一般為3-15分鐘,具體時(shí)間依據(jù)染液濃度和組織類型調(diào)整。蘇木素是一種堿性染料,能夠與細(xì)胞核中的酸性物質(zhì)結(jié)合,使細(xì)胞核呈現(xiàn)迷人的藍(lán)紫色。染色完成后,用自來(lái)水沖洗切片,去除多余的染液,此時(shí)細(xì)胞核已被染成藍(lán)紫色,為后續(xù)的染色步驟奠定了基礎(chǔ)。
分化與返藍(lán):細(xì)胞核染色的優(yōu)化
蘇木素染色后,切片需放入分化液中進(jìn)行分化。分化液通常為1%鹽酸酒精,分化時(shí)間要嚴(yán)格控制,一般為數(shù)秒至數(shù)十秒,以免過(guò)度分化導(dǎo)致染色過(guò)淺。分化步驟的目的是去除細(xì)胞核上過(guò)多的蘇木素染料,使細(xì)胞核的染色更加清晰。分化后,用自來(lái)水沖洗切片,然后進(jìn)行返藍(lán)處理。返藍(lán)液一般采用弱堿性溶液,如氨水或碳酸鋰飽和水溶液,將切片放入返藍(lán)液中浸泡數(shù)秒至數(shù)分鐘,再用流水沖洗。返藍(lán)的作用是使細(xì)胞核由分化后的紫紅色恢復(fù)為清晰的藍(lán)色,確保細(xì)胞核的染色效果達(dá)到很好。
伊紅染色:細(xì)胞質(zhì)的著色
完成蘇木素染色和返藍(lán)處理后,切片進(jìn)入伊紅染色步驟。伊紅是一種酸性染料,能夠與細(xì)胞質(zhì)中的堿性物質(zhì)結(jié)合,將細(xì)胞質(zhì)染成溫柔的粉紅色。將切片放入伊紅染液中染色2-5分鐘,具體時(shí)間可根據(jù)實(shí)際情況調(diào)整。染色完成后,用乙醇和二甲苯進(jìn)行脫水與透明處理,為封片做好準(zhǔn)備。
封片:切片的保存與觀察
然后,當(dāng)載玻片上無(wú)二甲苯時(shí),用中性樹膠封片。中性樹膠能夠固定切片,防止其干燥和變形,同時(shí)使切片在顯微鏡下觀察時(shí)更加清晰。一張精美的HE染色切片就此完成,細(xì)胞核呈藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)呈紅色,組織形態(tài)和細(xì)胞特征一目了然。
返藍(lán)、伊紅和蘇木素染色液在病理切片制作中遵循著嚴(yán)格的先后順序,每一步都不可或缺。它們相互配合,共同完成了對(duì)切片的染色,為病理診斷提供了重要的依據(jù)。