檢測試劑盒辦法的三大特色表現：1.穩(wěn)定性好：包被的抗原的穩(wěn)定性可使檢測試劑盒的效期得到保證，早期以組成肽為包被抗原的檢測試劑盒效期只有3-4個月，選用基因工程抗原后效期很大程度延長了。2.基因工程抗原將特異性抗原決定簇基因融合表達，表達產品包括更多的抗原決定簇，可進步檢測試劑盒的靈敏度，進步檢出率。3.分子量大：組成肽選用化學辦法制備，由于工藝的限制，組成數量有限，只能達到數百個氨基酸。而使用基因工程制備的抗原，分子量更大。殺滅曲線的建立：按照20-25%的細胞密度將未轉化的細胞鋪在合適的培養(yǎng)板上。普魯士藍染色液(沙黃法)

加藥時間:由于基因轉染到細胞內之后要一段時間才能表達出蛋白質。所以篩選不能太早；但是也不能太晚，因為轉染了外源基因的細胞代謝負荷較大，增值較慢，時間長了就會被沒有外源基因轉入的細胞所淹沒，終導致篩選不出陽性克隆，一般要在轉染24小時之后才開始加G418篩選。隨著細胞的代謝G418的濃度和活性都回下降，所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml。培養(yǎng)液:加藥篩選約6天左右，細胞會大量死亡，孔中只剩下的細胞。這時會出現兩個問題：1.死亡的細胞會裂解釋放出有害物質，導致那些有neo表達的陽性細胞死亡，即非選擇性死亡。2.孔中細胞數目很少，細胞之間的信號會變得很弱，也會導致陽性細胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養(yǎng)液：假如你要轉染3T3細胞，在3T3細胞匯合度達到80%的時候，換液，培養(yǎng)過夜之后收集培養(yǎng)液，通過濾器消毒，和新鮮的培養(yǎng)液按1：1混合備用。再轉染后篩選過程中就可以應用這種培養(yǎng)基。肝素鈉溶液(0.5%,625U/ml,無菌)注意事項：為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

我們如何避免實驗中基質效應？基質效應可以通過產品研發(fā)階段的優(yōu)化盡可能去消除的。上海通蔚生物科技針對產品研發(fā)進行了多種優(yōu)化。檢測試劑盒在開發(fā)進程中，標準品不選用人或動物血清、血漿作為標準曲線的稀釋液，只能選用其仿照物。我們量身定制的緩沖液系統，這些優(yōu)化后的緩沖液體系能很好消除基質效應。還有當檢測某個分析物時，其他相關因子或類似結構因子如果有非特異性結合，也會導致基質效應，我們也因此做了大量的交叉反應，確保沒有明顯的交叉反應和干擾。而且我們檢測試劑盒必須通過嚴格的基質效應測試，全部包括線性稀釋和摻入回收率實驗，并把測試結果記錄在說明書中。

檢測試劑盒以免疫學反應為根底，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術。由于抗原、抗體的反應在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗刷除去剩余的游離反應物，從而確保試驗結果的特異性與穩(wěn)定性。運用雙抗體夾心法測定標本水平。用純化的抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入，再與HRP符號的抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，通過完全洗刷后加底物TMB顯色。檢測試劑盒TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線核算樣品的濃度。當往某些溶液中加入一定量的酸和堿時，有阻礙溶液pH變化的作用，稱為緩沖作用。

PAGE連續(xù)蛋白上樣緩沖液，科研專門***科研實驗中試劑取用應注意事項：1. 固體試劑的取用:取用固體藥品時藥匙必須是干凈的.一支藥匙不能同時取用兩種或兩種以上的試劑.藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈,以備下次使用.藥匙的兩端為大小兩匙,取固體量較多時用大匙,較少時用小匙2. 取用不定量(較多)液體——直接傾倒a. 瓶塞必須倒放在桌面上【防止藥品腐蝕實驗臺或污染藥品】；b. 直接傾倒時瓶口必須緊挨試管口，試管45度，并且緩緩地倒【防止藥液損失】；c. 貼標簽的一面必須朝向手心處【防止藥液灑出腐蝕標簽】。磷酸緩沖鹽溶液可以破壞生物蛋白的結構及生物特性。氯化鋰乙醇溶液(2mol/L)

檢測試劑盒有穩(wěn)定的重復性和可靠性。普魯士藍染色液(沙黃法)

具體的檢測試劑盒規(guī)矩說明操作方法：汲取液體時要選用量程和需求量接近的微量加樣器吸，減少差錯。液體悉數參加酶標孔后，將酶標板放在桌子上平行悄悄搖晃30s，檢測試劑盒使液體充沛混合均勻，也使其得到充沛的反應。孵育時要使蓋板膜封好酶標板，避免水分蒸騰，以防曲線不成線性。試驗前的30min將試劑盒中的所有試劑從冰箱取出，使試劑盒中的所有試劑與提取好的樣品溶液的溫度相同，酶標板只要取出所需量。因為底物顯色劑對光及其敏感，因此要避光保存。手工洗板時每次參加洗滌液后。應靜置15～30s，不要將一個酶標孑L中的洗滌液濺入另一酶標孔中，避免交叉污染。甩去洗滌液后將酶標板放在毛巾或吸水紙上拍干。普魯士藍染色液(沙黃法)