LISA檢測試劑盒實驗結果分析的三個小建議:實驗中樣品都要做復孔或三孔,然后計算每個濃度標準品的平均OD值,復孔的變異系數(shù)應該小于20%。平均OD值減去空白孔的OD值。制作標準曲線。 以減去本底后的OD值為X軸,標準品的濃度為Y軸,利用作圖軟件得出一個合適的計算方法。建議使用合適的軟件來作圖,比如CurveExpert 1.4。這款軟件能夠給出很多種方法(比如直線、半對數(shù)、對數(shù)、四參數(shù)方程等)并從中選擇一條合適的方程。要想檢驗某條曲線是否與表中數(shù)據(jù)吻合,可以將標準品的濃度作為未知數(shù),將對應的OD值帶入該方程,計算出標準品的濃度,得到的結果應該與實際濃度很接近(+/-10%)。選擇擬合度高的那條曲線。BMC原代分離步驟:較上面是血漿,血漿層和淋巴細胞分離液之間是淋巴細胞層呈白膜狀。磷酸鉀緩沖液
檢測試劑盒運用注意事項:在加入底物液A液和底物液B液后,一般顯色時間為15~20min即可。若顏色較淺,可延長反響時間到30min。反之,則減短反響時間。反響停止液為2M硫酸,防止接觸皮膚。不要運用過了有用日期的檢測試劑盒;也不要運用過了有用期的試劑盒中的任何試劑,摻雜運用過了有用期的檢測試劑盒會引起靈敏度的降低;不要交流運用不同批號試劑盒中的試劑。試劑盒具有的幾個優(yōu)點:吸附性能好,空白值低,孔底透明度高的固相載體;穩(wěn)定的重復性和可靠性;靈敏、特異的抗體。蔗糖溶液(2mol/L)濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶。
測定血清中的某些酶,如CK,離體(采集血液)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過適當?shù)倪€原作用才能重新開始。如CK—NAC檢測試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實驗研究證明,NAC對血清中已失活的CK活化過程約需180 S。這就是CK測定為什么要延遲時間較長的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC推薦方法測定時需要磷酸吡哆醛預活化。需要強調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測定酶活性的結果要高些。
試劑空白吸光度是反映試劑質(zhì)量的指標之一。每種試劑都有一定的空白吸光度范圍,試劑空白吸光度的改變往往提示該試劑的變質(zhì);如利用Trinder反應為原理的檢測試劑會因含酚類物質(zhì)被氧化為醌而變?yōu)榧t色。堿性磷酸酶、r一谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶、淀粉酶等檢測試劑會因基質(zhì)分解出硝基酚或酚基苯胺而變黃。有些試劑久置后變渾濁。這些情況均可使空白吸光度升高。丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶等負反應,在放置過程中其試劑空白吸光度會因NADH自行氧化為NAD+而下降。原則上,吸光度上升的反應,其試劑空白吸光度越低越好,不能超過一個高限;相反,吸光度下降的反應,其試劑空白吸光度不能低于一個低限。因此,試劑空白吸光度限值,常作為程序參數(shù)輸入儀器,如經(jīng)核查超限,儀器會自動報警,提示更換試劑。檢測試劑盒安全性:試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。
液體固體試劑正確取用試劑的方法過程:液體試劑的取用方法試劑瓶取用試劑,用左手持量筒(或試管),并用大姆指指示所需體積刻度處。右手持試劑瓶(注意:試劑標簽應向手心避免試劑沾污標簽),慢慢將液體注入量筒到所指刻度。讀取刻度時,視線應與液體凹面的低處保持水平倒完后,應將試劑瓶口在容器壁上靠一下,再將瓶子豎直醫(yī)學|教育網(wǎng)搜集整理,以免試劑流至瓶的外壁。如果是平頂塞子,取出后應倒置桌上,如瓶塞頂不是扁平的,可用食指和中指(或中指和無名指)將瓶塞夾?。ɑ蚍旁跐崈舻谋砻婷笊希胁豢蓪⑺鼨M置桌上。檢測試劑盒液體悉數(shù)參加酶標孔后,將酶標板放在桌子上平行悄悄搖晃30s。淀粉樣物質(zhì)染色液(Puchtler堿性剛果紅法)
檢測試劑盒吸入液體時的的方法是吸兩檔打一檔。磷酸鉀緩沖液
檢測試劑盒實驗注意事項:封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。底物請避光保存。嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準。所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。本試劑不同批號組分不得混用。檢測試劑盒實驗為什么要設置復孔?計算平均值,確保實驗結果更準確;解決實驗中誤操作造成的跳孔現(xiàn)象;計算CV值,對實驗的操作和檢測試劑盒的精密度進行評估。加樣要準確、快速。如果加樣不準確,酶生成物的量不能確定,檢測試劑盒直接影響顯色結果。顯色的深淺及A值的測定與加入顯色劑和終止液的量有關,所以加樣應慎重。磷酸鉀緩沖液