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外泌體實驗 bug 多，靠這個方法我提前完成了課題！
做外泌體課題真的是讓人歡喜讓人憂，外泌體作為近幾年的熱點是個發(fā)高分的好方向，可實驗操作起來也常常是虐人千百遍。就拿外泌體提取來說，使用超速離心法提取細胞上清里的外泌體，好不容易完成繁瑣的步驟，最終卻看不到任何沉淀。使用同樣的方法提取尿液里的外泌體，倒是有不少沉淀，可是純度又不達標。不同組織來源的外泌體，提取方法各異。凈來回折騰，浪費樣本了。
外泌體實驗真是 bug 多，經(jīng)歷了這么多樣本，頭禿了，課題進度還是毫無進展！身經(jīng)百戰(zhàn)的大師兄一語點醒夢中人「提取外泌體是有技巧的，要根據(jù)樣本的不同，選用不同的外泌體提取方法，方能達到事半功倍之效?！乖趲熜值闹笇?dǎo)下，我外泌體提取又快又好，課題進度大大提前，下面為大家附上好物分享與提取經(jīng)驗。
選擇符合樣本特性的提取方法才能百戰(zhàn)不殆，例如常見的超速離心法和聚合物沉淀法提取的外泌體中可能混有多種雜質(zhì)，抗體親和法和密度梯度離心法倒是能保證純度，但是外泌體結(jié)構(gòu)不完整。
下面總結(jié)了如何提取各種樣本的外泌體，快快收藏！
1、尿液篇
為什么我的尿液樣本會天差地別，BCA 濃度差了一百倍？？
可能原因：健康樣本，疾病樣本，不同的疾病樣本，其外泌體豐度差異很大，一定要多準備一些樣本。
我的尿液樣本提取的外泌體怎么老是有污染，凍存樣本外泌體不太多。
可能原因：對于尿液樣本來說，會有一定的污染概率，需要提前除菌操作，或者提取外泌體后過純化 EPF 柱；另外，針對尿液將用于臨床檢測的需求而言，樣本越新鮮提取，越接近實際情況，越有助于提高診斷準確性。
2、乳液篇
為什么我的乳液樣本提取出來的蛋白濃度這么高？
可能原因：乳液如牛奶外泌體含有豐富的蛋白質(zhì)，在樣本預(yù)處理和后續(xù)提取過程中需要先去除雜蛋白和脂質(zhì)；
乳液外泌體粒徑比普通的 293T 細胞的外泌體大了好多，是啥原因？
可能原因：乳液中本身外泌體的粒徑會偏大；
3、血液篇
為什么我的血液有時候提取不到外泌體？粒徑也不對？
可能原因：溶血，會導(dǎo)致大部分外泌體破損，加上不同的提取方法外泌體提取效率 15%-40% 左右，又會損失很大一部分，基本上就很難看到外泌體了；也可能是樣本凍存太久，外泌體降解了，有時候也是很難提取到外泌體的；
為什么我的血漿樣本提取的外泌體沉淀非常的多，而且很粘稠重懸不了？
可能原因：血漿背景比較豐富，含有的雜蛋白比較多，從純度的角度看，需要先去除雜蛋白，后續(xù)的實驗才能進一步推進，不過這也會損失一部分得率；
4、細胞上清篇
為什么不同細胞外泌體分泌差異很大？同樣的方法得到差一個數(shù)量級的結(jié)果！
可能原因：不同外泌體分泌外泌體用于信息交流的頻率不同，分泌的外泌體量差異很大；
不加血清培養(yǎng)的細胞上清外泌體為啥這么少？
可能原因：沒有添加血清的情況下，細胞生長所需營養(yǎng)不夠，無法產(chǎn)生足夠多的外泌體，甚至有的細胞在饑餓情況下會吞噬外泌體，建議用無外泌體血清或者外泌體專用無血清培養(yǎng)基；
我的外泌體提取濃度很低，無法解決后續(xù)實驗需求的量和濃度怎么辦？
可能原因：不同方法提取外泌體得率差異很大，確實有的方法為了提高純度會損失很多得率，這個時候可以考慮在前期把上清液做一下濃縮，再優(yōu)化外泌體濃度，用于后續(xù)實驗；
5、組織篇
組織外泌體為啥我提取出來的都是雜質(zhì)？
可能原因：組織外泌體提取最大問題是預(yù)處理的液化，用諸如膠原酶等，先液化，再過濾，再往后進行，方法差異很大，需要有高分文獻支持，否則可能后續(xù)提取不到外泌體；
組織外泌體為啥有時候能提取到，有時候提取不到？
可能原因：組織外泌體分泌量根據(jù)來源不同，差別也是很大的，建議先找一些樣本，做預(yù)實驗，確保量足夠再用于后續(xù)的規(guī)?；瘜嶒?。
看來外泌體提取中的門道真是五花八門，細節(jié)決定成敗，提取中某個步驟不夠規(guī)范也會導(dǎo)致實驗結(jié)果崩盤。只有充分了解不同樣本的特性，做好實驗前和實驗中的準備加處理工作，方能提高實驗效率。
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